如何高效提取纯化核酸？

核酸的提取关键是去除蛋白质，通常情况下，先用某些蛋白水解酶消化大部分蛋白质后，再用有机溶剂抽提，在单价阳离子存在下，核酸在乙醇中形成沉淀。 做DNA或RNA定量时，应在260nm和280nm两个波长下读数。在260nm的读数用于计算样品中的核酸浓度，OD值为1相当于大约50μg/ml双链DNA，40μg/ml单链DNA或RNA及大约20μg/ml单链寡核苷酸。根据在260nm以及在280nm的读数比值估计核酸的纯度。DNA及RNA纯品的OD260/OD280值分别是1.8和2.0，如果样品中污染有蛋白或酚，其OD260/OD280将明显低于此值，此时无法对样品中的核酸进行精确定量。

核酸提取的方法有煮沸裂解法，磁珠法，阴离子去污剂法，离心柱法，热裂解碱法，超声法、酶解法及浓盐法等多种方法。不同的方法有不同的特点。

了根据具体的实验材料和实验要求来选择合适的方法。为了获得高质量的核酸，分离纯化核酸时，需要注意以下几点：

1，为了保证核酸结构与功能的研究，完整的一级结构是最基本的要求，因为遗传信息全部贮存在一级结构之中，核酸的一级结构还决定其高级结构的形式以及和其它生物大分子结合的方式。

2，尽量简化操作步骤，缩短提取过程，以减少各种有害因素对核酸的破坏。

3，减少化学因素对核酸的降解，为避免过酸、过碱对核酸链中磷酸二酯键的破坏，操作多在 pH4 - 10 的条件下进行。

4，减少物理因素对核酸的降解，物理降解因素主要是机械剪切力，其次是高温。

5，防止核酸的生物降解，细胞内或外来的各种核酸酶消化核酸链中的磷酸二酯键，直接破坏核酸的一级结构。

核酸提取对试剂的要求和操作步骤具有严格要求，除了根据具体的实验材料和实验要求来选择合适的方法。为了高效得到高质的核酸供后续实验，推荐使用Roche的High Pure 系列试剂盒进行提取和分离核酸。

Roche的High Pure PCR Template Preparation Kit可以从不同的样品材料中分离核酸，包括全血，培养细胞和组织等样品，得到的核酸可以用于聚合酶链反应和限制性消化反应。

High Pure Viral RNA Kit设计用于从血清或血浆样品中分离完整的病毒RNA。病毒RNA在PCR级水中洗脱后可直接用于RT-PCR分析。

High Pure FFPET DNA/RNA Isolation Kit采用快速和优化的技术，可以从福尔马林固定，石蜡包埋的组织研究样品中分离和纯化总DNA/RNA。

Roche核酸提取试剂盒优势：

--节省时间，可在较短时间内纯化多个样品。

--操作较简便，减少接触有害试剂。

--得率较高，避免溶剂萃取/沉淀法等造成的目标核酸损失。

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