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全光谱流式细胞分选仪基础知识

1135 人阅读发布时间:2023-12-21 16:22

1.什么是全光谱流式细胞术基础理论
在传统流式的基础上,全光谱流式不仅拥有着很多相同原理,还有着独特的光学收集和分析特征。在全光谱流式细胞术中,每个荧光染料的发射光谱在定义的波长范围内被一组检测器中所捕获。就这样,每个荧光染料的流式荧光光谱都可以被识别、记录其光谱特征,并在多色实验中充分使用。

2.全光谱流式细胞术简介
当单个细胞甚至悬液中的颗粒流过全光谱流式细胞分析仪中的单个或多个激光器时,流式细胞术可以实现对细胞和颗粒快速地鉴定并分析表征。流式细胞仪的检测器可以检测到每个细胞或颗粒的散射光信息和多个荧光信号,最终分析细胞或颗粒上的信息。全光谱流式细胞术就这样可以同时对单个样本中的数百万个细胞进行精准检测,成为当下热门的实验技术!使用全光谱流式细胞术,完成单细胞分析,可以探索出细胞的异质性和单细胞动态变化,其细胞鉴定和表征分析广泛应用于科学研究、生物技术、生物制药和临床应用中。全光谱流式细胞术的常见应用包括免疫学、传染病、肿瘤免疫学、微生物学、生物标志物鉴定和药物发现以及分子生物学。人们越来越想要了解探索复杂的免疫系统,并且利用免疫细胞来提高健康状况,这都使高维细胞检测越来越普及,赛默飞的前沿流式仪器和荧光染料也助力全光谱流式细胞术有了在单个样本中更高的多参数分析能力。

 
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流式细胞仪的大体轮廓,显示一种能够分离单个细胞的分选仪器

3.全光谱流式和传统流式细胞术比较
传统仪器和光谱仪器都可以使用光电倍增管(PMT)或雪崩光电二极管(APD)作为光电检测器。APD具有比PMT 更高的量子率,这一属性提高了在 >650 nm的波长下的性能,增强了流式细胞仪的红光和近红外检测能力。在生物实验中,PMT和APD 在可见波长范围内的表现是相似的。
流式Panel设计需要考虑仪器配置、相应荧光染料、靶标蛋白的表达水平和画门分析思路。一般来说,全光谱流式的Panel设计遵循与传统流式相同的原则,包括画门思路、匹配荧光染料亮度与抗原强度、分析并减少荧光溢出及扩散误差,还有设置多种实验对照。但是,设计光谱Panel需要考虑更多因素。还有,全光谱流式与传统的流式一样,最终数据结果存储为Flow Cytometry Standard (FCS) 格式文件,后续统计分析,报告细胞特征。

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4.全光谱流式细胞术优势
Invitrogen Bigfoot 全光谱超高速流式细胞分选仪旨在适应现有工作流程的同时扩展您的应用领域。配置高达9个激光器和60个检测器,既可以选择传统补偿模式进行数据分析,也可以切换成全光谱分析模式,以进行更精细的细胞亚群鉴定。整合式生物安全柜和气溶胶管理系统有助于保护您和您的样品。
光谱流式细胞术的优点之一是能够增加可识别的亚群的潜在数量。在技术进步到分选之前,不可能在物理上分离这些独特的种群。Bigfoot技术的独特之处在于能够实时计算光谱分解矩阵,并将分选指令应用于分选仪进行颗粒分离。Bigfoot光谱分选仪的一个主要优点是,由于其完备的生物安全性,它适用于分选病原生物。这已经成为普渡大学实验室使用光谱分选的一个重要方面。

 
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